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1.制備細胞懸液：

關(guān)于懸液培養(yǎng)的細胞，可直接進行下面的過程2（計數(shù)與核算進程）。假設(shè)計數(shù)目標為貼壁生長的細胞，首要需將培養(yǎng)物按如下過程制備成細胞懸液。

①停止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出，用PBS洗培養(yǎng)物一次。

②給培養(yǎng)瓶內(nèi)參加1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期間不斷在鏡下調(diào)查。當細胞變圓挨近脫壁時，棄消化液。

③參加一定量的培養(yǎng)液（假設(shè)這些培養(yǎng)細胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使細胞脫壁而制成細胞懸液。

2.計數(shù)與核算進程

①在細胞計數(shù)板中心放置計數(shù)的蓋玻片。

②用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿停止。

③置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。關(guān)于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者，關(guān)于細胞團按單個細胞計數(shù)。

④按下式計數(shù)細胞懸液的密度：細胞密度＝（4個大格細胞總數(shù)/4）×104個/ml 。

二、注意事項：

①必須使松散成單個細胞，取樣計數(shù)前，充分混勻細胞懸液。

②顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞核算。假設(shè)細胞團>10％，闡明細胞松散不充分。